จากโมโนเมอร์ AEEA ไปจนถึงไดเมอร์

อัตราส่วนยาต่อแอนติบอดี (DAR) เป็นคุณลักษณะคุณภาพที่สำคัญของยาคอนจูเกตแอนติบอดี (ADC) ที่ส่งผลโดยตรงต่อประสิทธิภาพและความเป็นพิษ โดยทั่วไป DAR ในอุดมคติจะเป็น 2-4 แต่เพย์โหลดที่มีประสิทธิภาพจำนวนมาก เช่น MMAE และ DM1 มีความสามารถในการไม่ชอบน้ำสูง เมื่อใช้สายสั้นหรือตัวเชื่อมโยง PEG ตัวเดียว, DAR ที่เกิน 4 นำไปสู่การรวมกลุ่มและการชำระออกของแอนติบอดีที่เร่งขึ้น การแนะนำ AEEA-AEEA ถือเป็นแนวทางแก้ไขปัญหานี้อย่างมีประสิทธิภาพ
เมื่อเปรียบเทียบกับตัวเชื่อมโยง AEEA ตัวเดียวเออีเอ-เออีอีเอความยาวโซ่ PEG เพิ่มขึ้นเป็นสองเท่าและมีความสามารถในการละลายน้ำได้ดีกว่า หน่วยไดเมอร์แต่ละหน่วยมีพันธะอีเทอร์ 4 พันธะและพันธะเอไมด์ 2 พันธะ ซึ่งสามารถจับโมเลกุลของน้ำได้มากขึ้นและสร้างชั้นความชุ่มชื้นที่หนาแน่นขึ้น เมื่อยาที่ไม่ชอบน้ำหลายชนิดเชื่อมต่อกับพื้นผิวแอนติบอดีผ่าน AEEA-AEEA ชั้นไฮเดรชั่นสามารถป้องกันอันตรกิริยาที่ไม่ชอบน้ำระหว่างยาได้อย่างมีประสิทธิผล และป้องกันการรวมตัวของแอนติบอดี ข้อมูลการทดลองแสดงให้เห็นว่า ADC ที่สร้างขึ้นโดยใช้ AEEA-AEEA คงความเสถียรของคอลลอยด์ (อัตราการรวมกลุ่ม)<5%) even when DAR reaches 6-8, while the control using single AEEA shows significant precipitation when DAR>4.
กลยุทธ์การควบคุม DAR อ้างอิงถึงการเชื่อมโยงล่วงหน้าของ AEEA-AEEA กับยาในเทคโนโลยีการเชื่อมต่อที่มุ่งตรงที่ตำแหน่ง และจากนั้นทำปฏิกิริยากับซิสเทอีนที่ถูกทำวิศวกรรมบนแอนติบอดี โดยการปรับอัตราส่วนโมลาร์ของยาตัวเชื่อมต่อต่อแอนติบอดี (โดยปกติ 3:1 ถึง 10:1) สามารถควบคุมค่า DAR ได้อย่างแม่นยำ ตัวอย่างเช่น ส่วนเกิน 2- เท่าสามารถให้ผลลัพธ์เป็น DAR2 ส่วนเกิน 4- เท่าสามารถให้ผลลัพธ์ DAR4 และส่วนเกิน 8 เท่าสามารถให้ผลลัพธ์เป็น DAR6-8 HIC-HPLC หรือแมสสเปกโตรเมตรีสามารถระบุการกระจายตัวของ DAR ได้อย่างแม่นยำ สำหรับการบ่งชี้เนื้องอกที่ต้องการภาระงานสูง เช่น มะเร็งเต้านมที่มีการแสดงออกของ HER2 ต่ำ และมะเร็งปอดชนิดเซลล์ขนาดเล็ก AEEA-AEEA ทำให้ DAR สูงเป็นไปได้ และปรับปรุงผลการฆ่าเนื้องอกได้อย่างมีนัยสำคัญ การศึกษาพรีคลินิกแสดงให้เห็นว่า ADC ของ DAR6 เพิ่มอัตราการยับยั้งเนื้องอกประมาณ 40% เมื่อเปรียบเทียบกับ ADC ของ DAR4 ในขนาดยาเดียวกัน โดยไม่เพิ่มความเป็นพิษอย่างมีนัยสำคัญ